引用本文
张涛, 宋继科, 景常莹, 蒋文君, 吴建峰, 解孝锋, 李丽杰, 毕宏生. 基于网络药理学和生物信息学探讨龙胆泻肝汤治疗葡萄膜炎的分子机制[J]. 中华眼视光学与视觉科学杂志, 2018,20(8): 484-491.
Tao Zhang, Jike Song, Changying Jing, Wenjun Jiang, Jianfeng Wu, Xiaofeng Xie, Lijie Li, Hongsheng Bi. The Molecular Mechanism of LongdanXiegan Decoction in Treating Uveitis Based on Network Pharmacology and Bioinformatics[J]. CHINESE JOURNAL OF OPTOMETRY OPHTHALMOLOGY AND VISUAL SCIENCE, 2018,20(8): 484-491.  
Doi:10.3760/cma.j.issn.1674-845X.2018.08.006
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基于网络药理学和生物信息学探讨龙胆泻肝汤治疗葡萄膜炎的分子机制
张涛, 宋继科, 景常莹, 蒋文君, 吴建峰, 解孝锋, 李丽杰, 毕宏生

250014 济南,山东中医药大学（张涛、宋继科、景常莹、吴建峰）;250002 济南,山东省中西医结合眼病防治重点实验室 山东省高校中西医结合眼病防治技术（强化）重点实验室（张涛、宋继科、景常莹、蒋文君、吴建峰、解孝锋、毕宏生）;250002 济南,山东中医药大学眼科研究所（蒋文君、毕宏生）;250002 济南,山东中医药大学附属眼科医院（解孝锋）;250062 济南,山东省内分泌代谢病研究所（李丽杰）

通讯作者：毕宏生（ORCID：0000-0002-6965-9626）,hongshengbi1@126.com;李丽杰,yankeboshi@163.com

第一作者：张涛（ORCID：0000-0002-6161-6533）,drgdye@163.com

收稿日期: 2018-04-19
基金资助: 国家自然科学基金（81674032, 81373826）; 山东省中医药科技发展计划（2015-147）
摘要

目的 探讨龙胆泻肝汤治疗葡萄膜炎的药效学研究和分子机制分析。方法 实验研究。在体实验验证龙胆泻肝汤治疗葡萄膜炎的疗效,利用中药网络药理学数据和分析平台查询并筛选复方龙胆泻肝汤的入血有效成分,并进行网络拓扑分析其可能的治疗靶点。通过查询多种已知疾病靶点数据库,筛选葡萄膜炎的治疗靶点,并与有效成分治疗靶点构建出有效成分-疾病治疗靶点网络,并筛选出关键节点;拓扑分析关键节点参与的信号通路并进行富集分析,筛选出中药复方龙胆泻肝汤治疗葡萄膜炎的可能信号通路。结果 在体实验结果证实龙胆泻肝汤能够减轻大鼠结膜充血、虹膜粘连,减轻前房、睫状体和视网膜炎症细胞浸润,具有治疗葡萄膜炎的的作用;网络药理学分析显示龙胆泻肝汤治疗葡萄膜炎主要通过MAPK信号通路、促性腺激素信号通路和雌激素信号通路,减少炎症因子的产生和细胞浸润,调节机体免疫状况,调控葡萄膜炎的发生发展。结论 龙胆泻肝汤治疗葡萄膜炎可能主要是通过MAPK信号通路、促性腺激素信号通路和雌激素信号通路,调控炎症细胞和炎症因子、自身免疫等来实现。

关键词: 龙胆泻肝汤; 葡萄膜炎; 中药复方; 网络药理学
The Molecular Mechanism of LongdanXiegan Decoction in Treating Uveitis Based on Network Pharmacology and Bioinformatics
Tao Zhang1,2, Jike Song1,2, Changying Jing1,2, Wenjun Jiang2,3, Jianfeng Wu1,2,3, Xiaofeng Xie2,4, Lijie Li5, Hongsheng Bi2,3
1Shandong University of Traditional Chinese Medicine, Jinan 250014, China
2Shandong Provincial Key Laboratory of Integrated Traditional Chinese and Western Medicine for Prevention and Therapy of Ocular Diseases, Shandong Provincial Universities' Key Laboratory of Prevention and Therapy of Ocular Diseases, Jinan 250002, China
3Department of Ophthalmology, Shandong University of Traditional Chinese Medicine, Jinan 250002, China
4Affiliated Ophthalmology Hospital of Shandong University of Traditional Chinese Medicine, Jinan 250002, China
5Institute of Endocrinology and Metabolism in Shandong, Jinan 250062, China
Corresponding author:Hongsheng Bi, Shandong Provincial Key Laboratory of Integrated Traditional Chinese and Western Medicine for Prevention and Therapy of Ocular Diseases, Shandong Provincial Universities' Key Laboratory of Prevention and Therapy of Ocular Diseases, Jinan 250002, China (Email: hongshengbi1@126.com); Lijie Li, Institute of Endocrinology and Metabolism in Shandong, Jinan 250062, China (Email: yankeboshi@163.com)
Fund:National Natural Science Foundation (81674032, 81373826); Projects of Medical and Health Technology Development Program in Shandong Province (2015-147)
Abstract

Objective: To study the molecular mechanism of LongdanXiegan Tang for treating uveitis.Methods: This was a experimntal study. The Chinese herbal medicine pharmacology data and analysis platform were used to search and to screen the effective components of a compound injection of LongdanXiegan Tang, and to analyze its possible therapeutic targets based on the network topology. By searching a variety of known disease target databases, we can screen the therapeutic target of uveitis disease and construct the active ingredient-disease treatment target network with the target of effective component treatment and to screen out the key nodes. Using topological analysis of the key nodes involved in the signal pathways and enrichment analysis, and screening out the possible Chinese medicine compound Radix LongdanXiegan Tang for the treatment of uveitis, may help to identify the signal pathways.Results: After the main active ingredient for screening and target prediction of LongdanXiegan Tang were completed, the therapeutic target of uveitis was screened, and an enrichment analysis of the signal pathways was completed. LongdanXiegan Tang can reduce the production of inflammatory cytokines and infiltration and affect the immune status, regulating the occurrence and development of uveitis by mainly regulating the MAPK signaling pathway and promoting both the GnRH and estrogen signaling pathways.Conclusions: LongdanXiegan Tang can treat uveitis primarily through the MAPK, GnRH and estrogen signaling pathways, regulating the inflammatory cells and inflammatory cytokines and autoimmunity.

Keyword: LongdanXiegan Tang; uveitis; traditional Chinese medicine compound; network pharmacology

葡萄膜炎多发生于青壮年, 是常见致盲性疾病[1], 严重危害人类视觉健康。但是, 葡萄膜炎发生的作用机制目前仍不十分清楚。已明确的是, 感染、自身免疫、氧化损伤、免疫遗传等多种机制涉及葡萄膜炎的发病情况。免疫调控是探讨葡萄膜炎发病与治疗的关键机制。而长时间免疫抑制治疗葡萄膜炎的不良反应明显[2], 给患者造成了很大的困扰。中药及其复方以整体观和辨证论治为指导思想, 通过调和脏腑气血、改善循环等方式, 在治疗疾病方面具有独到的效果, 近年来临床应用发现龙胆泻肝汤治疗葡萄膜炎具有较好的治疗作用[3, 4]。

龙胆泻肝汤（LongdanXiegan Tang, LXT）源自《医方集解》, 由龙胆草、黄芩、栀子、泽泻、木通、车前子、当归、生地黄、柴胡和生甘草共十味中药组成, 泻肝胆实火, 具有免疫调控作用。目前, 中药及其复方作用机制和作用靶点不明确, 限制了中医药的临床推广应用, 网络药理学从系统生物学理论入手, 研究其生物活性成分及其作用靶点。本研究以网络药理学为切入点, 探究龙胆泻肝方治疗葡萄膜炎的有效活性成分和作用靶点, 揭示其作用分子机制, 对龙胆泻肝方科学内涵的阐释以及临床推广意义重大。本研究从口服生物利用度和药物相似性方面对龙胆泻肝方已知成分进行筛选, 预测龙胆泻肝方入血活性成分和作用靶点。蛋白质相互作用网络分析预测龙胆泻肝方治疗葡萄膜炎的靶点并进行富集分析, 探讨其可能分子机制。流程见图1。

图1. 龙胆泻肝汤治疗葡萄膜炎的分子机制分析流程图
LXT, 龙胆泻肝汤; PPI, 蛋白质和蛋白质相互作用; CPPI, 核心蛋白相互作用; AMDE：毒药物动力学, 指机体对外源化学物的吸收、分布、代谢及排泄过程。Figure 1. The molecular mechanism analysis flow chart of LongdanXiegan Tang in the treatment of uveitis.
LXT, LongdanXiegan Tang; PPI, protein-protein interaction; CPPI, core protein-protein interaction; AMED: abbreviation in pharmacokinetics and pharmacology for "absorption, distribution, metabolism, and excretion".

1 材料和方法
1.1 材料

1.1.1 实验动物 6周龄SPF级雌性Lewis大鼠, 体质量160~180 g, 购自北京维通利华实验动物有限公司[生产批号：CSK（京）2016-0006]。所有实验方案、方法和实验过程均通过山东中医药大学实验室动物管理和使用委员会的批准（批号：7006）。

1.1.2 实验仪器和试剂 龙胆泻肝汤配方颗粒（产品批号：1311007W, 广东华润三九医药股份有限公司）; Genesis-D动物眼部照相机（日本Kowa公司）; 苏木素-伊红染色试剂盒（北京索莱宝生物科技有限公司）; 结核菌素（Tuberculin, TB） （美国Difco公司）; 完全弗氏佐剂（Complete freund' adjuvant, CFA） （美国Sigma公司）。

1.2 方法

1.2.1 分组 大鼠实验性自身免疫性葡萄膜炎（Experimental autoimmuneuveitis, EAU）模型建立与分组, 随机数字表法将Lewis大鼠随机分为对照组（Control组）、模型组（EAU组）和龙胆泻肝汤治疗组（LXT组）, 每组各10只。EAU组：根据Cui等[5, 6]研究方法, 在大鼠后肢足垫、腹壁和躯干皮下注射100 μ l含IRBP1177-1191和TB的CFA乳糜液; LXT组：与EAU组大鼠同样处理, 并于大鼠眼部开始出现炎症时, 进行龙胆泻肝汤灌胃治疗（10 gkg-1d-1）。

1.2.2 实验大鼠眼前节炎症观察和组织病理学检测 每天定时对各组大鼠进行眼部炎症观测, 记录各组大鼠眼部炎症变化。造模12 d后, 各实验组大鼠采用水合氯醛麻醉, 摘取眼球, 置于4%多聚甲醛固定。固定后标本进行脱水、包埋、切片、HE染色, 于显微镜下观测炎症变化, 并对眼部炎症进行分级[3]。

1.2.3 龙胆泻肝汤活性成分筛选和治疗靶点预测 查询中药网络药理学数据和分析平台（TCMSP）, 查找中药复方龙胆泻肝方成分并构建成分数据。结合研究成果, 将中药吸收、分布、代谢及排泄（Absorption distribution metabolism excretion, ADME）参数口服生物利用度（Oral bioavailability, OB）≥ 30%和药物相似性（Drug-likeness, DL）≥ 0.18作为筛选条件, 筛选出中药复方龙胆泻肝汤有效活性成分, 并进行有效活性成分的靶点预测。

1.2.4 龙胆泻肝汤“ 有效成分─靶点网络” 构建

利用Cytoscape软件构建龙胆泻肝汤“ 有效成分-靶点网络” 。在网络图中, 龙胆泻肝汤活性成分及其作用靶点用“ 节点（Node）” 来表示, “ 边（Edge）” 表示生物活性成分和作用靶点的相互作用关系。筛选较为重要的节点和边, 查找文献, 并对此进行分析。

1.2.5 葡萄膜炎治疗靶点的查询 以“ Uveitis” 作为葡萄膜炎疾病的关键词, 查询TTD、DrugBank、OMIM、GAD和PhamGKB等数据库, 获得葡萄膜炎的治疗靶点, 并删除重复靶点。

1.2.6 蛋白质相互关系构建和关键靶点筛选 将筛选出的龙胆泻肝汤活性成分作用靶点和葡萄膜炎相关靶点导入Cytoscape软件, 检索BioGRID、BIND、MINT、HPRD、DIP和GIRD数据库, 将龙胆泻肝汤成分靶点网络和葡萄膜炎靶点网络合并, 得到龙胆泻肝汤治疗葡萄膜炎的直接和间接作用靶点。

根据文献研究, 将网络中所有节点自由度的中位数作为筛选的界线点, 筛选出所有自由度大于中位数的节点, 并定义“ Big hubs” , 这些节点为关键节点。龙胆泻肝汤可能就是直接或间接通过这些节点治疗葡萄膜炎。

1.2.7 Pathway富集分析 Pathway分析能够显示蛋白质相互关系网络中的不同信号通路的重要性程度, 本研究采用Cytoscape软件中ClueGo分析插件。分析结果代表Pathway富集状态的网络图。ClueGO分析出的网络图是基于Kappa统计量创建的, 该图中的每一个节点代表一个Term, 节点之间的连线反映了Term之间的相关性, 而节点的颜色则反映了该节点的富集分类情况（隶属于哪一个信号通路）, 节点的大小反映了该信号通路的显著性, 节点越大表示显著性越大, 该信号通路的重要性越大。本研究利用ClueGo插件对龙胆泻肝汤治疗葡萄膜炎的关键靶点进行富集分析, 并制作饼状图显示信号通路重要性。

1.3 统计学方法

实验研究。采用SPSS 19.0软件进行数据分析。数据经Kolmogorov-Smirnov检验显示呈正态分布, 以 ± s 表示, 且方差齐, 3组间比较采用单因素方差分析, 两两比较采用LSD-t进行分析。以P< 0.05为差异有统计学意义。

2 结果
2.1 大鼠眼前节炎症表现

Genesis-D动物眼部照相机记录大鼠眼部炎症变化。结果显示, 对照组大鼠眼前节未见炎症变化（见图2A）; 开始造模5 d后EAU组和LXT组大鼠眼前节出现球结膜血管轻度扩张、充血, 并逐渐加重; 造模12 d后EAU组大鼠眼前节炎症表现最为严重, 结膜血管严重充血、瞳孔膜闭、大量纤维素渗出以及眼球突出等（见图2B）。LXT组大鼠炎症逐渐减轻（见图2C）, 造模后3周基本消退。

图2. 大鼠建立免疫性葡萄膜炎后12 d眼前节炎症在裂隙灯显微镜下表现
A：对照组（眼前节未见明显改变）; B：实验性自发性免疫性葡萄膜炎组（球结膜血管扩张充血, 瞳孔膜闭并伴纤维素渗出）; C：龙胆泻肝汤治疗组（结膜血管轻度扩张）Figure 2. Inflammation symptom of anterior segment of experimental autoimmuneuveitis rats on day 12 under slit lamp.
A: Control group (no apparent lesions in anterior segment). B: Experimental autoimmuneuveitis group (conjunctival blood vessels diate and hyperemia, pupillary membrance closure with fibrin exudating). C: LongdanXiegan Tang group (slightly dilated of conjunctival blood vessels).

2.2 大鼠眼前节病理学变化

HE染色检测各实验组大鼠造模12 d后眼前节炎症介质变化。结果显示, 对照组大鼠眼前节未见炎症变化（见图3A-C）; EAU大鼠虹膜严重粘连, 前房、虹膜、睫状体和视网膜出现大量淋巴细胞、单核细胞和中性粒细胞, 炎症评分为3.5± 0.4（见图3D-F）; LXT组大鼠虹膜粘连, 前房、虹膜、睫状体和视网膜轻中度炎症细胞浸润, 炎症评分为17.5± 0.6（见图3G-I）, 2组炎症评分差异具有统计学意义（P< 0.001）。

图3. 免疫性葡萄膜炎造模12 d 后大鼠虹膜、睫状体、视网膜组织病理学检查（HE, × 200）
A-C：对照组（未见炎症细胞浸润）; D-F：实验性自发性免疫性葡萄膜炎组（虹膜粘连, 房水、虹膜、睫状体及视网膜出现淋巴细胞等炎症细胞浸润）; G-I：龙胆泻肝汤治疗组（出现少量炎症细胞浸润）Figure 3. Histopathology of the iris, ciliarybody and retina of experimental autoimmuneuveitis rats on day 12 (HE, × 200).
A-C: Control group (no infiltration of inflammatory cells). D-F: Experimental autoimmuneuveitis group (infiltration of many inflammatory cells in aqueous humor, iris, ciliarybody, and retinal lymphocytes). G-I: LongdanXiegan Tang group (slight infiltration of inflammatory cells).

2.3 龙胆泻肝汤生物活性成分筛选和ADME分析

通过对TCMSP数据库对龙胆泻肝汤复方中10味中药已报道成分和ADME参数进行检索, 成分结果为：龙胆63个, 柴胡289个, 车前子55个, 生地76个, 木通43个, 泽泻46个, 当归125个, 栀子19个, 黄芩58个, 甘草280个, 总共1 054个成分, 除去重复者为961个成分。以口服OB≥ 30和DL≥ 0.18作为标准对龙胆泻肝汤入血的有效成分进行筛选, 共得到162个有效成分（见图4A）。中药复方龙胆泻肝汤各味中药口服OB≥ 30和DL≥ 0.18成分比例见图4B。查询Target-Prediction数据库, 筛选龙胆泻肝汤有效活性成分的作用靶点, 去除重复部分, 得到119个作用靶点。

图4. 参照ADME龙胆泻肝汤有效成分分布图
A：符合筛选标准的龙胆泻肝汤有效成分; B：龙胆泻肝汤各味中药符合标准的成分比例。ADME, 吸收、分布、代谢及排泄; RG, 龙胆草; RB, 柴胡; SP, 车前子; DRR, 生地; AC, 木通; RA, 泽泻; RAS, 当归; FG, 栀子; RS, 黄芩; RGH, 甘草Figure 4. ADME parameter distribution of the active ingredients in LongdanXiegan Tang.
A: Components that meet the criteria for screening in LongdanXiegan Tang. B: Component ratio in accordance with the screening conditions in each herb in LongdanXiegan Tang. ADME, absorption, distribution, metabolism, excretion; RG, radix gentianae; RB, radix bupleuri; SP, semen plantaginis; DRR, dried rehmanniaroot; AC, akebiae caulis; RA, rhizomaalismatis; RAS, radix angelicaesinensis; FG, fructusgardenia; RS, radix scutellariae; RGH, radix glycyrrhizae.

2.4 龙胆泻肝汤“ 活性成分-靶点网络” 构建和分析

将筛选查到龙胆泻肝汤活性成分和作用靶点导入Cytoscape软件, 构建“ 活性成分-靶点网络” 。利用Cytoscape软件进行龙胆泻肝汤“ 活性成分-靶点网络” 的构建, 见图5。构建成功后对网络图进行分析, 筛选图中的关键节点, 筛选出龙胆泻肝汤治疗葡萄膜炎的关键靶点。

图5. 龙胆泻肝汤“ 有效成分-靶点网路” 图Figure 5. Compound-target network of LongdanXiegan Tang.

2.5 葡萄膜炎疾病靶点的筛选

将Urevis作为葡萄膜炎的关键词进行疾病相关治疗靶点的筛选。TTD、DrugBank和OMIM等是国际著名的疾病治疗靶点检测数据库, 笔者通过搜索这些数据库查询葡萄膜炎治疗相关靶点, 分别筛选出24、2和11个, 共得到28个葡萄膜炎治疗相关靶点。

2.6 龙胆泻肝汤治疗葡萄膜炎的蛋白网络构建和关键靶点筛选

2.6.1 龙胆泻肝汤治疗葡萄膜炎的蛋白网络构建 机体内信号的调控是一个复杂的网络, 并非单个信号通路, 不同的信号通路和靶点之间会有交会和信号的转导。因此, 药物在疾病的治疗调控过程中并非单纯的和治疗靶点相结合, 同时还会和其他的靶点相作用, 从而发挥多靶点的疾病治疗作用。蛋白质之间的相互作用关系数据库及其网络为研究靶点的直接、间接作用方式提供了新的途径。从构建的成分靶点网络中可以得到龙胆泻肝汤可以直接或者间接和3 052个靶点发生关系, 这些靶点之间的联系可以多达80 664种。对葡萄膜炎相关靶点构建蛋白质相互作用网络, 发现与葡萄膜炎直接或者间接相关的靶点有1 065种。

2.6.2 龙胆泻肝汤治疗葡萄膜炎的关键 龙胆泻肝汤治疗葡萄膜炎的蛋白质相互作用关系非常复杂, 利用网络拓扑学对蛋白质相互作用网络节点进行分析, 筛选关键节点。筛选出的关键节点在多个相互作用中具有重要作用, 传递更多的信息, 具有更高的效率, 在龙胆泻肝汤治疗葡萄膜炎蛋白质网络中的作用更加重要。如图6所示, 通过2次设定“ Big hubs” 58和81进行筛选, 得到112个关键节点。

图6. 龙胆泻肝汤治疗葡萄膜炎关键节点筛选策略
A：龙胆泻肝汤治疗葡萄膜炎的蛋白网络; B：关键节点初步筛选; C：龙胆泻肝汤治疗葡萄膜炎的关键节点Figure 6. Target screening strategy for key nodes in LongdanXiegan Tang.
A: The core protein-protein network of LongdanXiegan Tang and uveitis. B: Big hubs. C: The key node of LongdanXiegan Tang in the treatment of uveitis.

2.7 龙胆泻肝汤治疗葡萄膜炎的机制分析

ClueGO是Cytoscape软件中的生物分析绘图插件, 利用ClueGO对筛选出的龙胆泻肝汤治疗葡萄膜炎关键节点进行分析, 得出这些关键节点参与的信号通路, 并对这些信号通路进行富集分析, 探讨龙胆泻肝汤治疗葡萄膜炎的可能作用方式。结果如图7所示, 这些关键节点主要参与丝裂原活化蛋白激酶（Mitogen-activated protein kinase, MAPK）信号通路、促性腺激素信号通路和雌激素信号通路等。

图7. 龙胆泻肝汤治疗葡萄膜炎的信号通路富集分析结果Figure 7. Results of signal pathway analysis of LongdanXiegan Tang in the treatment of uveitis.

3 讨论

近年来, 葡萄膜炎的发病率逐渐增加, 相应的治疗方法逐渐多样化, 中药复方龙胆泻肝汤治疗葡萄膜炎特别是前葡萄膜炎受到越来越多的关注, 本研究采用龙胆泻肝汤治疗EAU, 能够减轻大鼠葡萄膜炎的发病并加速炎症的消退, 具体作用机制还未见明确报道。针对中药及其复方研究局限性的限制, 本研究从网络药理学和生物信息学等方面入手, 拓扑分析龙胆泻肝汤治疗葡萄膜炎的分子机制。龙胆泻肝汤由龙胆草、黄芩、栀子、泽泻、木通、车前子、当归、生地黄、柴胡和生甘草等十味药材组成, 本研究利用中药网络药理学数据和分析平台查询并筛选复方龙胆泻肝汤的入血有效成分, 并根据进行网络拓扑分析其可能的治疗靶点。通过查询多种已知疾病靶点数据库, 筛选出葡萄膜炎的治疗靶点, 并与有效成分治疗靶点构建出有效成分-基因治疗靶点, 富集分析中药复方治疗疾病的可能信号通路。分析结果显示, 龙胆泻肝汤治疗葡萄膜炎可能主要与MAPK信号通路, 促性腺激素信号通路以及雌激素信号通路等有密切关系。

MAPK是一种能够介导信号从细胞表面到细胞核的丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶, 能够被细胞因子、激素、神经递质等多种细胞外物质激活。何唯等[7]研究发现, LPS诱导的大鼠葡萄炎MAPK通路活性增强, 抑制MAPK通路活化能够减轻大鼠葡萄膜炎症表现。MAPK可分为多个亚族, 如ERK、p38、JNK和ERK5等, 其介导的细胞通路由相应的亚族命名, 如ERK信号通路等[8]。ERK广泛存在于各种组织, 参与细胞的增殖分化的调控。多种生长因子受体、营养相关因子受体等都需要ERK的活化来完成信号转导过程。JNK家族是细胞对各种应激原诱导的信号转导的关键分子, 参与细胞对辐射、渗透压、温度变化等应激反应。p38介导炎症、凋亡等, 因而成为抗炎药物的靶位。最新研究显示, 氧化应激参与葡萄膜炎的发病进程[9], 在自身免疫性葡萄膜炎的发病过程中, 氧化应激损伤视锥细胞和视杆细胞, 通过活化JNK细胞通路调控氧化应激能够改善葡萄膜炎的症状[10]。葡萄膜炎的发病过程中, 肿瘤坏死因子α （Tumor necrosis factor-α , TNF-α ）含量增加[11, 12, 13, 14], 并能够通过激化p38 MAPK途径调控CD1、DCs等细胞参与葡萄膜炎的发生发展[15], 运用SB203580（p38抑制剂）阻断p38 MAPK从而能够阻断CD1a、CD40、CD80、CD86、HLA-DR、CD83等众多葡萄膜炎关键因子的上调[16]。

雌激素信号通路主要是由雌激素与雌激素受体（Estrogen receptor, ER）及其激活的相应的下游蛋白组成, 雌激素和其受体结合能激活胞质中的激酶或调控基因转录, 在炎症反应、新陈代谢以及心血管等疾病过程中起重要的调节作用[17]。最近研究结果显示, TH17细胞的正常发育和功能与雌激素密切相关, 雌激素水平的增高对促进IL-17的分泌具有重要的调控作用, 影响葡萄膜炎的发生发展进程[18, 19]。此外, 在前葡萄膜炎的发生发展过程中, 雌激素与其受体结合活化雌激素信号通路, 能够减少E选择素和白介素6等炎症因子的表达水平, 减轻细胞浸润[20]。

综上所述, 龙胆泻肝汤能够减轻EAU大鼠的发病病情和缩短病情持续时间, 通过网络药理学对其具体机制分析得出可能是通过MAPK通路和雌激素信号通路等发挥抗炎效果。后续研究可以此为基础进行实验设计和研究。同时, 本研究为中药复方治疗疾病机制研究提供了新的思路。

利益冲突申明 本研究无任何利益冲突

作者贡献声明 张涛：收集数据, 参与选题、设计及资料的分析和解释; 撰写论文; 根据编辑部的修改意见进行修改。宋继科、景常莹、蒋文君：参与资料的分析和解释。吴建峰、解孝锋：参与论文方法指导。李丽杰、毕宏生：参与论文的选题、设计和修改论文的结果结论

The authors have declared that no competing interests exist.

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