引用本文
曹琼洁, 赵晓婷, 敬霞, 王教, 陈晓燕, 闫东升, 瞿佳. microRNA-182抑制人角膜上皮细胞增殖和迁移[J]. 中华眼视光学与视觉科学杂志, 2018,20(8): 503-509.
Qiongjie Cao, Xiaoting Zhao, Xia Jing, Jiao Wang, Xiaoyan Chen, Dongsheng Yan, Jia Qu. MicroRNA-182 Inhibits the Proliferation and Migration of Human Corneal Epithelial Cells[J]. CHINESE JOURNAL OF OPTOMETRY OPHTHALMOLOGY AND VISUAL SCIENCE, 2018,20(8): 503-509.  
Doi:10.3760/cma.j.issn.1674-845X.2018.08.009.
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microRNA-182抑制人角膜上皮细胞增殖和迁移
曹琼洁, 赵晓婷, 敬霞, 王教, 陈晓燕, 闫东升, 瞿佳
325027 温州医科大学附属眼视光医院 省部共建眼视光学和视觉科学国家重点实验室
通讯作者：瞿佳（ORCID：0000-0003-1678-966X）,jqu@wzmc.net

第一作者：曹琼洁（ORCID：0000-0002-6890-9603）,vicky.cqj@163.com

收稿日期: 2018-06-22
基金资助: 温州市科技计划项目（Y20160188）
摘要

目的 通过体内动物实验与体外细胞实验来阐明microRNA-182（miR-182）在角膜上皮损伤修复中的功能。方法 实验研究。体内实验选取5只C57BL/6J野生型小鼠,通过机械刮伤法构建小鼠角膜上皮损伤修复模型作为实验组,对侧眼作为对照组,通过实时定量RT-PCR法检测miR-182在损伤修复过程 （损伤后48 h）的表达。体外实验采用脂质体介导的方法将miR-182和随机序列寡核苷酸链转染入人角膜上皮细胞（HCECs）,通过细胞增殖实验（MTS法）和细胞克隆形成实验检测细胞增殖和生长能力,流式细胞术检测细胞周期,细胞划痕实验检测细胞迁移能力。MiR-182表达量及细胞实验各参数2组间比较采用独立样本 t检验。结果 体内实验中,与对照组相比,实验组中5个样本量的miR-182在角膜上皮损伤修复过程中表达水平显著下调（ t=147.6、79.2、136.8、41.3、89.8,均 P<0.001）。体外实验中,miR-182组相对细胞数目为（81±5）%,与阴性对照组（100%）相比显著减少（ t=6.6, P=0.003）,同时miR-182组细胞克隆数明显少于阴性对照组。细胞周期检测结果显示实验组处于G1期细胞数量比例为（49±7）%,明显高于阴性对照组的（35±4）%（ t=-3.0, P=0.041）。此外,细胞迁移实验结果显示miR-182组HCECs细胞迁移的距离为（99±12）μm,而阴性对照组的迁移距离为（213±14）μm（ t=10.8, P=0.001）,迁移速度明显变慢。结论 miR-182通过抑制角膜上皮细胞的增殖与迁移,从而对角膜上皮损伤修复起到负调控的作用。

关键词: 角膜损伤修复; miR-182; 角膜上皮细胞; 增殖; 迁移
MicroRNA-182 Inhibits the Proliferation and Migration of Human Corneal Epithelial Cells
Qiongjie Cao, Xiaoting Zhao, Xia Jing, Jiao Wang, Xiaoyan Chen, Dongsheng Yan, Jia Qu
State Key Laboratory of Ophthalmology, Optometry and Vision Science, Eye Hospital of Wenzhou Medical University, Wenzhou 325027, China
Corresponding author:Jia Qu, State Key Laboratory of Ophthalmology, Optometry and Vision Science, Eye Hospital of Wenzhou Medical University, Wenzhou 325027, China (Email: jqu@wzmc.net)
Fund:Science and Technology Project of Wenzhou (Y20160188)
Abstract

Objective: We investigated the in vivo and in vitro effects of microRNA-182 (miR-182) , which modulates post-transcriptional regulation of gene expression, on corneal epithelial cell proliferation, migration, and wound healing.Methods: In this experimental research, mouse corneal epithelial wound healing of five mouse was initiated by a scrape injury. Realtime reverse transcriptase polymerase chain reaction (RT-PCR) was performed to detect the expression level of miR-182 in the mouse corneal epithelium during the wound healing process (48 hours post scraping). Lipofectamine RNAiMAX reagent was used to transfect human corneal epithelial cells (HCECs) in vitro with either miR-182 or negative control RNA oligo. Cell proliferation assay (MTS), cell colony-forming assay, and flow cytometry were used to evaluate the effects of miR-182 on cell proliferation and cell cycle. An in vitro wound-healing assay (the HCECs were wounded by placing a scratch along the surface of each culture) was carried out to evaluate the effect of miR-182 on cell migration. Data were analyzed using independent t test.Results: The in vivo expression of miR-182 in experimentally wounded corneal epithelia was significantly lower than in the non-wounded controls ( t=147.6, 79.2, 136.8, 41.3, 89.8, all P<0.001). In vitro, the relative number of cells in the experimental group transfected with miR-182 was (81±5)%, which was significantly less than that in the control group transfected with negative control RNA oligo, 100% ( t=6.6, P=0.003). Further, the number of clones in the experimental group was remarkably decreased compared to that in the control group. The percentage of transfected cells in G1 arrest was (49±7)%, which was significantly higher than that in the control group, (35±4)% ( t=-3.0, P=0.041). In addition, the migration distance of HCECs in the transfected cells, 99±12 μm, was shorter than in the control cells, 213±14 μm ( t=10.8, P=0.001).Conclusions: miR-182 negatively regulates the corneal epithelial wound healing process by inhibiting corneal epithelial cell proliferation and migration.

Keyword: corneal wound healing; miR-182; corneal epithelium cell; proliferation; migration

角膜上皮位于眼角膜最外层, 因其完整性和紧密性对防止病原体渗透进入内层组织起保护屏障作用[1]。角膜上皮的自我更新是保持角膜透明度和正常视力的重要过程, 这种自我更新是在一系列调节细胞增殖、迁移和分化的细胞因子的控制下进行的[2, 3]。临床上, 外伤、感染和手术等常易导致角膜上皮损伤, 从而影响上皮细胞间的连接, 引起细胞膜的通透性和选择性发生变化, 从而影响其屏障功能, 如果不能顺利修复, 外界的致病因子侵害就可能导致组织水肿, 改变角膜透明度, 严重者引起失明[4]。

MicroRNA（miRNA）是一类长约22个核苷酸的内源性非编码单链RNA分子, 其功能主要是与靶基因mRNA的3′ 非翻译区（3′ UTRs）通过互补性结合, 从而反向调控靶基因的表达[5, 6]。近些年研究发现多种miRNAs对角膜上皮损伤修复具有重要的调控作用[7, 8, 9]。本实验室前期研究也发现 microRNA-204（miR-204）在小鼠角膜上皮损伤修复的过程显著下调, 深入研究证明miR-204通过影响靶基因sirt1的表达从而对角膜上皮细胞的增殖和迁移起抑制作用[10]。而microRNA-182（miR-182）作为角膜上皮中表达水平较高的miRNA之一, 在角膜上皮细胞中的功能尚未见报道。本研究分别通过体内动物实验与体外细胞实验来研究miR-182对人角膜上皮细胞增殖与迁移能力的影响, 为临床上角膜外伤受损后的治疗提供新的理论依据。

1 对象与方法
1.1 动物和细胞

C57BL/6J 野生型小鼠, 雄性, 8周龄, 体质量（22± 2）g, 购自上海斯莱克实验动物有限责任公司[生产批号：SCXK（沪）2012-0002]。人角膜上皮细胞（HCECs）由日本Araki Sasaki教授惠赠。本研究经温州医科大学动物伦理委员会批准（批号：wydw2017-0141）, 动物饲养于实验动物中心, 保持室温（25± 2）℃, 予以12 h/12 h的昼夜节律, 光照强度为500 lx, 给予充足的食物饮水。

1.2 试剂与仪器

氯胺酮购自温州医科大学附属眼视光医院药房; 甲苯噻嗪、表皮生长因子、胰岛素均购自美国Sigma公司, DMEM/F12培养基、胎牛血清FBS、0.25% Trypsin-EDTA、Lipo-fectamineTMRNAi MAX转染试剂、Trizol试剂均购自美国Invitrogen公司; miR-182和随机序列寡核苷酸链均购自美国Ambion公司; 细胞增殖实验（MTS法）试剂盒购自美国Promega公司; Cycletest Plus DNA Reagent试剂盒购自美国BD公司; AlgerBrush II购自美国Alger 公司; 7500型荧光实时定量PCR仪、Real-time PCR（RT-PCR）所用试剂和探针均购自美国ABI公司; SpectraMax M5酶标仪购自美国Molecular Devices公司。

1.3 构建小鼠上皮损伤模型

配置氯胺酮浓度为87 mg/kg与甲苯噻嗪浓度为13 mg/kg的复合溶液作为麻醉剂, 5只小鼠以0.06 ml/10 g的剂量通过腹腔注射进行全身麻醉, 同时眼表点0.5%盐酸丙美卡因进行表面麻醉。选取右眼作为实验组, 使用Algerbrush Ⅱ 工具采用机械刮伤法沿角膜缘边界向角膜中心方向刮去全部角膜上皮层, 涂抹红霉素眼膏以降低感染风险; 左眼作为对照组, 未进行机械损伤。在角膜损伤后约48 h, 观察到伤口愈合区域达到90%以上时, 沿角膜缘边界分别刮取双眼全部角膜上皮细胞, 用于提取RNA。

1.4 RT-PCR

Trizol试剂法分别提取双眼角膜上皮细胞总RNA, 采用ABI公司的TaqMan MicroRNA Assays试剂盒, 用该公司特定设计的引物合成cDNA, 再用FAM标记的探针检测miRNA的表达水平, 以U6为内参, 采用△ Ct方法分析miR-182的相对水平。 RT-PCR反应体系为20 μ l, 扩增条件为：95 ℃预变性10 min; 95 ℃变性15 s, 60 ℃退火延伸60 s, 共40个循环。

1.5 细胞培养

HCECs细胞所用培养基配方为DMEM/F12（11）含10% FBS、5 ng/ml表皮生长因子（Epithlium growth factor, EGF）、5 μ g/ml胰岛素, 置于37 ℃、5% CO2培养箱中培养, 细胞接近80%融合时用0.25% 胰蛋白酶消化传代, 同时接种细胞进行实验。

1.6 脂质体转染

将对数生长期的HCECs接种于多孔培养板, 用脂质体转染法将终浓度为50 nmol/L的miR-182转染入细胞, 以相同方法转染一段长度和结构都与miRNA类似的随机序列寡核苷酸链作为阴性对照（Negative control, NC）。具体转染步骤根据LipofectamineTM RNAi MAX转染说明书, 置37 ℃、5% CO2培养箱中培养。

1.7 检测方法

1.7.1 细胞增殖实验 接种细胞到96孔板中, 各组设6个复孔, 24 h后按上述方法转染miR-182和NC, 转染72 h后弃去原培养液, 按试剂盒说明书于每孔中加入80 μ l无血清F12培养液和20 μ l MTS混合液（MTSPMS =191）, 37 ℃孵育2 h后, 用酶标仪在490 nm波长下读取光密度值（D）。

1.7.2 细胞划痕实验 接种细胞到12孔板中, 24 h后按上述方法转染miR-182和NC, 待细胞接近完全融合, 用100 μ l枪头刮去各孔等宽距离内的细胞, 拍照记录划痕宽度, 继续培养12 h, 再次记录划痕宽度。

1.7.3 流式细胞术分析 接种细胞到12孔板中, 24 h后按上述方法转染miR-182和NC, 48 h后用0.25%胰蛋白酶消化收集细胞, 70%乙醇固定, 根据说明书步骤用Cycletest Plus DNA Reagent试剂盒染色, 流式细胞术检测细胞周期各时相的百分率。

1.7.4 平板克隆实验 接种细胞到12孔板中, 24 h后按上述方法转染miR-182和NC, 24 h后用0.25%胰蛋白酶消化重悬细胞, 以2 000个/孔的密度接种6孔板, 37 ℃培养7 d, 4%甲醛固定30 min, 结晶紫染色20 min, 拍照记录克隆斑数目与大小。

1.8 统计学方法

实验研究。数据采用SPSS 16.0软件进行统计学分析。所有数据均用 ± s 表示。两两比较采用独立样本t检验。以P< 0.05为差异有统计学意义。

2 结果
2.1 miR-182在角膜上皮损伤修复过程中的表达

角膜上皮损伤修复模型建模成功48 h后收集损伤修复眼的角膜上皮组织和对照眼组织。与对照组相比, 实验组中5个样本量中的miR-182表达均明显降低, 差异均有统计学意义（t=147.6、79.2、136.8、41.3、89.8, 均P< 0.001）, 见图1。

图1. 对照眼和损伤眼角膜中miR-182的表达情况
1-5为样本量编号, 每样本重复实验3次。与对照眼比较, aP< 0.001Figure 1. miR-182 expression in the control eye and injured eye corneas.
1-5 indicate sample code, 3 replicates per sample. aP< 0.001 compare with control eyes.

2.2 miR-182对HCECs增殖能力的影响

MTS法检测转染miR-182和NC 48 h后的D值, 计算相对细胞数目=实验组D值/对照组D值× 100%。结果显示miR-182组相对细胞数目为（81± 5）%, 与NC组（100%）相比显著减少, 差异有统计学意义（t=6.6, P=0.003）。平板克隆形成实验结果显示miR-182组细胞克隆数明显少于NC组, 克隆斑大小小于NC组, 见图2。流式细胞术检测细胞周期结果显示miR-182组处于G1期细胞数量比例为（49± 7）%, 明显高于NC组的（35± 4）%, 差异有统计学意义（t=-3.0, P=0.041）, 见图3。

图2. 平板克隆实验检测miR-182对HCECs克隆形成能力的影响
NC：转染了阴性对照的HCECs; miR-182：转染了miR-182的HCECs。拍照记录克隆斑数目与大小。HCECs , 人角膜上皮细胞Figure 2. Cell colony-forming assay was carried out to evaluate effect of miR-182 on colony formation by HCECs.
NC: HCECs were transfected with negative control; miR-182: HCECs were transfected with miR-182. The number and size of clones were photographed using a microscope. HCECs, human corneal epithelial cells.

图3. 流式细胞仪检测miR-182对HCECs细胞周期的影响……NC：转染了阴性对照的HCECs; miR-182：转染了miR-182的HCECs。HCECs, 人角膜上皮细胞Figure 3. Flow cytometry was carried out to evaluate effect of miR-182 on cell cycle of human corneal epithelial cells.……NC: HCECs were transfect with negative control; miR-182: HCECs were transfect with miR-182. HCECs, human corneal epithelial cells.

2.3 miR-182对HCECs的迁移能力的影响

在转染miR-182和NC 24 h后使细胞生长接近完全融合, 划痕拍照, 继续培养12 h, 细胞从划痕边缘迁移到划痕区, 再次对原有位置进行拍照, 2次记录的划痕宽度差值的1/2即为细胞迁移的距离。与NC组相比, miR-182组HCECs迁移速度明显较慢, 12 h后损伤未愈合区域较大, 细胞迁移的距离为（99± 12）μ m, 明显小于NC组的（213± 14）μ m（t=10.8, P=0.001）, 见图4。

图4. 划痕实验检测miR-182对人角膜上皮细胞迁移能力的影响
NC：转染了阴性对照的HCECs; miR-182：转染了miR-182的HCECs。显微镜拍照记录细胞迁移距离。HCECs, 人角膜上皮细胞Figure 4. Wound-healing assay was carried out to evaluate effect of miR-182 on cell migration of human corneal epithelial cells in vitro.
NC: HCECs were transfected with negative control; miR-182: HCECs were transfected with miR-182. The migration distance were photographed using a microscope. HCECs, human corneal epithelial cells.

3 讨论

临床上, 严重外伤、感染和手术等常易导致角膜上皮受损, 影响上皮细胞间的连接, 如果不能顺利修复, 则易受外界致病因子的侵害引起炎症反应, 严重者导致角膜新生血管、角膜雾状混浊、角膜瘢痕及角膜溃疡穿孔等并发症, 严重影响视力[11, 12, 13]。为了降低外伤及手术后的角膜感染风险, 较多研究都旨在探索角膜上皮损伤修复过程中的关键因子, 通过调控基因表达来促进伤口愈合的分子机制。已有部分研究表明microRNAs对角膜上皮损伤修复起重要的调控作用。Lin等[8]研究揭示了miR-205能通过抑制靶基因KCNJ10的表达水平来促进角膜损伤修复。Winkler等[9]发现miR-146a上调是导致糖尿病角膜损伤修复延缓的重要原因。此外, Guo等[14]研究表明miR-18a有助于透明质酸钠促进人角膜上皮细胞的增殖和迁移。Robinson等[15]发现miR-133b通过影响TGFβ 1、CTGF、SMA、 COL1A1的表达水平能减少小鼠准分子激光术后的瘢痕形成。以上研究说明, 表观遗传机制尤其是microRNAs对角膜上皮损伤修复具有普遍而重要的调控作用。

本实验室前期研究也证明了miR-204通过影响靶基因sirt1的表达从而抑制角膜上皮细胞的增殖和迁移[10]。本研究通过RT-PCR发现, 在小鼠角膜上皮损伤修复过程中, miR-182水平显著下调, 这提示miR-182在修复过程中也可能起到重要的调控作用。MiR-182是microRNA-183/96/182簇的一员, 该簇在感觉器官中发挥着重要作用。Muraleedharan等[16]通过敲除小鼠模型发现MicroRNA-183/96/182是通过调节角膜神经支配来协助角膜应对细菌感染。Wang等[17]研究表明miR-182是靶向NOX4在糖尿病角膜神经再生中的关键调节因子。

角膜上皮损伤修复过程主要涉及细胞迁移、细胞增殖分化、组织重构3个阶段, 在这个过程中, 角膜上皮细胞的增殖、迁移、黏附和分化起着至关重要的作用[18, 19]。基于此, 本研究通过在HCECs转染miR-182使其过表达来进一步研究miR-182对细胞增殖、迁移和克隆形成能力的影响。结果表明miR-182能明显抑制HCECs增殖和生长能力, 同时流式细胞术结果进一步表明miR-182导致HCECs阻滞在G1期, 无法顺利向S期过渡, 从而破坏正常的细胞周期流程, 抑制细胞增殖。此外, 划痕实验揭示了HCECs的迁移能力受到miR-182的显著抑制。

有报道发现, 在正常的角膜上皮损伤修复过程中, 角膜上皮细胞会发生上皮间质转化（Epithelial-mesenchymal transition, EMT）样改变[20, 21], EMT样改变是指上皮细胞失去上皮细胞的特征而获得间质细胞特征的生物学过程, 该过程在上皮来源的恶性肿瘤细胞获得迁移和侵袭能力中发挥了重要作用。miR-182一直是研究最多的癌症相关致癌miRNA之一, 在各种癌症组织中表达失调, 并且众多报道显示其具有抑制癌细胞的增殖、迁移的功能。而miRNA对肿瘤发生发展起调控作用普遍是通过结合靶基因mRNA的3′ UTR区进行转录后调控。
一个miRNA可具有多个靶基因, 一个靶基因也可由多个miRNA调控。已有研究发现miR-182通过调控靶基因c-met、MITF、BCL2和cyclin D2等抑制肺癌细胞和葡萄膜黑色素瘤细胞的增殖和迁移[22, 23]。Wang等[24]的研究揭示miR-182下调c-met表达从而抑制视网膜色素上皮细胞的增殖和迁移。而miR-182对角膜上皮细胞增殖和迁移的抑制作用是否是通过靶向调控上述靶基因来实现还需下一步的研究进行探索。

综上所述, 本研究通过体外动物实验和体内细胞实验揭示了miR-182在角膜上皮损伤修复中的关键作用, 有助于我们进一步理解角膜损伤修复中的表观遗传调控机制, 同时也为我们防治角膜病提供新的思路和靶点, 具有十分重要的理论价值和应用前景。

利益冲突申明 本研究无任何利益冲突

作者贡献声明 曹琼洁：参与选题设计, 实验研究, 收集数据, 资料的分析和解释; 撰写论文; 根据编辑部的修改意见进行修改。赵晓婷、敬霞：参与实验研究, 收集数据, 资料的分析和解释。王教、陈晓燕：参与选题、设计和修改论文的结果、结论。闫东升、瞿佳：参与选题、设计、资料的分析和解释, 修改论文中关键性结果、结论, 根据编辑部的修改意见进行核修

The authors have declared that no competing interests exist.

参考文献
[1] 许琛琛, 吴斯琪, 王勤美. 正常人眼角膜上皮层厚度的分布及其相关因素. 中华眼视光学和视觉科学杂志, 2015, 17(12): 712-716. DOI: DOI:10.3760/cma.j.issn.1674-845X.2015.12.003. [本文引用:1]
[2] 张丽颖, 瞿杨洛娃, 邹笃雷, 等. 组织工程角膜上皮移植重建眼表面的临床研究. 中华眼视光学与视觉科学杂志, 2016, 18(4): 209-214. DOI: DOI:10.3760/cma.j.issn.1674-845X.2016.04.004. [本文引用:1]
[3] Daniels JT, Notara M, Shortt AJ, et al. Limbal epithelial stem cell therapy. Expert Opin Biol Ther, 2007, 7(1): 1-3. DOI: DOI:10.1517/14712598.7.1.1. [本文引用:1]
[4] Kenchegowda S, Bazan HE. Significance of lipid mediators in corneal injury and repair. J Lipid Res, 2010, 51(5): 879-891. DOI: DOI:10.1194/jlr.R001347. [本文引用:1]
[5] He L, Hannon GJ. MicroRNAs: small RNAs with a big role in gene regulation. Nat Rev Genet, 2004, 5(7): 522-531. DOI: DOI:10.1038/nrg1379. [本文引用:1]
[6] Bartel DP. MicroRNAs: genomics, biogenesis, mechanism, and function. Cell, 2004, 116(2): 281-297. [本文引用:1]
[7] Funari VA, Winkler M, Brown J, et al. Differentially expressed wound healing-related microRNAs in the human diabetic cornea. PLoS One, 2013, 8(12): e84425. DOI: DOI:10.1371/journal.pone.0084425. [本文引用:1]
[8] Lin D, Halilovic A, Yue P, et al. Inhibition of miR-205 impairs the wound-healing process in human corneal epithelial cells by targeting KIR4. 1 (KCNJ10). Invest Ophthalmol Vis Sci, 2013, 54(9): 6167-6178. DOI: DOI:10.1167/iovs.12-11577. [本文引用:2]
[9] Winkler MA, Dib C, Ljubimov AV, et al. Targeting miR-146a to treat delayed wound healing in human diabetic organ-cultured corneas. PLoS One, 2014, 9(12): e114692. DOI: DOI:10.1371/journal.pone.0114692. [本文引用:2]
[10] An J, Chen X, Chen W, et al. MicroRNA expression profile and the role of miR-204 in corneal wound healing. Invest Ophthalmol Vis Sci, 2015, 56(6): 3673-3683. DOI: DOI:10.1167/iovs.15-16467. [本文引用:2]
[11] 袁一飞, 钱江, 张艳青. 还原型谷胱甘肽滴眼液促进翼状胬肉术后角膜上皮修复. 眼视光学杂志, 2009, 11(5): 372-374. DOI: DOI:10.3760/cma.j.issn.1674-845X.2009.05.015. [本文引用:1]
[12] Solomon A. Corneal complications of vernal keratoconjunctivitis. Curr Opin Allergy Clin Immunol, 2015, 15(5): 489-494. DOI: DOI:10.1097/ACI.0000000000000202. [本文引用:1]
[13] Alcalde I, Íñigo-Portugués A, Carreño N, et al. Effects of new biomimetic regenerating agents on corneal wound healing in an experimental model of post-surgical corneal ulcers. Arch Soc Esp Oftalmol, 2015, 90(10): 467-474. DOI: DOI:10.1016/j.oftal.2015.04.006. [本文引用:1]
[14] Guo Y, Lu X, Wang H. Downregulation of miR-18a induces CTGF and promotes proliferation and migration of sodium hyaluronate treated human corneal epithelial cells. Gene, 2016, 591(1): 129-136. DOI: DOI:10.1016/j.gene.2016.07.008. [本文引用:1]
[15] Robinson PM, Chuang TD, Sriram S, et al. MicroRNA signature in wound healing following excimer laser ablation: role of miR-133b on TGFβ1, CTGF, SMA, and COL1A1 expression levels in rabbit corneal fibroblasts. Invest Ophthalmol Vis Sci, 2013, 54(10): 6944-6951. DOI: DOI:10.1167/iovs.13-12621. [本文引用:1]
[16] Muraleedharan CK, McClellan SA, Barrett RP, et al. Inactivation of the miR-183/96/182 cluster decreases the severity of pseudomonas aeruginosa-induced keratitis. Invest Ophthalmol Vis Sci, 2016, 57(4): 1506-1517. DOI: DOI:10.1167/iovs.16-19134. [本文引用:1]
[17] Wang Y, Zhao X, Wu X, et al. microRNA-182 mediates sirt1-induced diabetic corneal nerve regeneration. Diabetes, 2016, 65(7): 2020-2031. DOI: DOI:10.2337/db15-1283. [本文引用:1]
[18] Liu CY, Kao WW. Corneal epithelial wound healing. Prog Mol Biol Transl Sci, 2015, 134: 61-71. DOI: DOI:10.1016/bs.pmbts.2015.05.002. [本文引用:1]
[19] Ziaei M, Greene C, Green CR. Wound healing in the eye: Therapeutic prospects. Adv Drug Deliv Rev, 2018, 126: 162-176. DOI: DOI:10.1016/j.addr.2018.01.006. [本文引用:1]
[20] Aomatsu K, Arao T, Abe K, et al. Slug is upregulated during wound healing and regulates cellular phenotypes in corneal epithelial cells. Invest Ophthalmol Vis Sci, 2012, 53(2): 751-756. DOI: DOI:10.1167/iovs.11-8222. [本文引用:1]
[21] Aomatsu K, Arao T, Sugioka K, et al. TGF-β induces sustained upregulation of SNAI1 and SNAI2 through Smad and non-Smad pathways in a human corneal epithelial cell line. Invest Ophthalmol Vis Sci, 2011, 52(5): 2437-2443. DOI: DOI:10.1167/iovs.10-5635. [本文引用:1]
[22] Li Y, Zhang H, Li Y, et al. MiR-182 inhibits the epithelial to mesenchymal transition and metastasis of lung cancer cells by targeting the Met gene. Mol Carcinog, 2018, 57(1): 125-136. DOI: DOI:10.1002/mc.22741. [本文引用:1]
[23] Yan D, Dong XD, Chen X, et al. Role of microRNA-182 in posterior uveal melanoma: regulation of tumor development through MITF, BCL2 and cyclin D2. PLoS One, 2012, 7(7): e40967. DOI: DOI:10.1371/journal.pone.0040967. [本文引用:1]
[24] Wang LH, Dong F, Reinach PS, et al. MicroRNA-182 suppresses HGF/SF-induced increases in retinal pigment epithelial cell proliferation and migration through targeting c-Met. PLoS One, 2016, 11(12): e0167684. DOI: DOI:10.1371/journal.pone.0167684. [本文引用:1]