目的 体外构建出形态结构功能正常的组织工程人角膜内皮（TE-HCE），并以猕猴动物模型验证其维持角膜透明的作用。方法 实验研究。以非转染人角膜内皮单克隆细胞株细胞（mcHCE细胞）为种子细胞，以去上皮层修饰羊膜（mdAM）为载体支架体外构建出TE-HCE，对其透明度、形态、细胞密度、组织学结构、超微结构、功能蛋白的荧光表达进行检测；采用穿透性角膜移植手术（PKP）对猕猴右眼分别移植TE-HCE（3眼，TE-HCE组）和mdAM（3眼，mdAM组），未移植的左眼作为正常对照眼（6眼，对照组），利用裂隙灯显微镜、角膜内皮镜、角膜测厚仪和眼压计对术后动物的角膜透明度、角膜内皮细胞密度（ECD）、中央角膜厚度（CCT）和眼压（IOP）进行在体检测，并利用荧光显微镜检测移植眼角膜内皮细胞的CM-DiI标记。数据处理均采用单因素方差分析。结果 体外构建的TE-HCE透明度高，具有与活体角膜内皮近似的形态结构，单层细胞密度高达（3 602±45）个/mm2，细胞连接蛋白和膜运输蛋白呈阳性表达；术后跟踪观测结果显示，TE-HCE移植眼的角膜没有出现明显的炎症和免疫排斥反应，角膜维持透明，虽然出现了轻度角膜水肿，但随着时间的推移CCT逐渐下降，术后181 d时单层细胞密度为（2 796±157）个/mm2；而mdAM移植眼的角膜则出现了明显的炎症反应，长入了新生血管，角膜持续混浊与水肿，厚度没有明显的下降趋势；各组间IOP的变化无明显差异。CM-DiI荧光检测结果显示TE-HCE移植眼的角膜内皮移植区的细胞均带有CM-DiI标记（来自于移植的TE-HCE）。结论 体外构建的高密度TE-HCE具有正常的形态结构，且功能蛋白表达正常，移植后能使猕猴角膜逐渐恢复透明度和厚度，表明TE-HCE在体内可重建出功能正常的角膜内皮，有望用于角膜内皮异常疾病的临床治疗。